質(zhì)粒小量提取試劑盒 高純度質(zhì)粒試劑盒

產(chǎn)品描述

     本試劑盒采用改進(jìn)SDS-堿裂解法裂解細(xì)胞，離心吸附柱內(nèi)的硅基質(zhì)膜在高鹽、低pH值狀態(tài)下選擇性地結(jié)合溶液中的質(zhì)粒DNA，再通過(guò)去蛋白液和漂洗液將雜質(zhì)和其它細(xì)菌成分去除，最后低鹽、高pH值的洗脫緩沖液將純凈質(zhì)粒DNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界公司特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好。克服了國(guó)產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。

2.去蛋白液配方，可以高效去除殘留的核酸酶，即使是核酸酶含量豐富的菌株如JM系列、HB101也可以輕松去除。有效防止了質(zhì)粒被核酸酶降解。

3.快速、方便，不需要使用有毒的benfei、氯仿等試劑，也不需要乙醇沉淀。獲得的質(zhì)粒產(chǎn)量高、純度好， 可以直接用于酶切、轉(zhuǎn)化、PCR、體外轉(zhuǎn)錄、測(cè)序等各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

運(yùn)輸和保存方法

1）本試劑盒在室溫儲(chǔ)存12個(gè)月不影響使用效果。

2）RNase A保存在即用型甘油緩沖液中，常溫運(yùn)輸，收到后，不超過(guò)25℃室溫至少保存6個(gè)月，4℃保存12個(gè)月，長(zhǎng)期保存放－20℃。

3）使用時(shí)，將試劑盒所帶的全部RNase A加入溶液P1后（終濃度100ug/ml）置于2-8℃保存。如果溶液P1中RNase A失活，提取的質(zhì)粒可能會(huì)有微量RNA殘留，在溶液P1中補(bǔ)加RNase A即可。

4）環(huán)境溫度低時(shí)溶液P2中SDS可能會(huì)析出渾濁或者沉淀，可在37℃水浴加熱幾分鐘，即可恢復(fù)澄清，不要?jiǎng)×覔u晃，以免形成過(guò)量的泡沫。

5）避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。

質(zhì)粒小量提取試劑盒 高純度質(zhì)粒試劑盒

  注意事項(xiàng)

1.所有的離心步驟均在室溫完成，使用轉(zhuǎn)速可以達(dá)到13,000rpm的傳統(tǒng)臺(tái)式離心機(jī)，如Eppendorf  5415C 或者類(lèi)似離心機(jī)。

2.提取質(zhì)粒的量與細(xì)菌培養(yǎng)濃度、質(zhì)粒拷貝數(shù)等因素有關(guān)。一般高拷貝質(zhì)粒，建議接種單菌落于 1.5-4.5 ml加合適抗生素的LB培養(yǎng)基， 過(guò)夜培養(yǎng)14-16個(gè)小時(shí)，可提取出多達(dá)20µg的純凈質(zhì)粒。如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)粒或大于10kb的大質(zhì)粒，應(yīng)適當(dāng)加大菌體使用量，使用5-10 ml過(guò)夜培養(yǎng)物，同時(shí)按比例增加P1、P2、P3的用量，其它步驟相同。

3.得到的質(zhì)粒DNA可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。OD260值為1相當(dāng)于大約50μg/ml DNA。電泳可能為單一條帶，也可能為2條或者多條DNA條帶，這主要是不同程度的超螺旋構(gòu)象質(zhì)粒泳動(dòng)位置不一造成，與提取物培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)短、提取時(shí)操作劇烈程度等有關(guān)。本公司產(chǎn)品正常操作情況下基本超螺旋可以超過(guò)90%。

4.質(zhì)粒DNA確切分子大小， 必須酶切線性化后，對(duì)比DNA分子量Marker才可以知道。處于環(huán)狀或者超螺旋狀態(tài)的的質(zhì)粒，泳動(dòng)位置不確定，無(wú)法通過(guò)電泳知道其確切大小。

5.洗脫液EB不含有螯合劑EDTA，不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫，但應(yīng)該確保pH大于7.5，pH過(guò)低影響洗脫效率。用水洗脫質(zhì)粒應(yīng)該保存在－20℃。質(zhì)粒DNA如果需要長(zhǎng)期保存，可以用TE緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影響下游酶切反應(yīng)，使用時(shí)可以適當(dāng)稀釋。

6.本產(chǎn)品僅作科研用途！

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